「分享」CAR-T细胞治疗肿瘤项目生物样本管理经验

　　大家好，我是WJ，今天，我想跟大家分享我认为细胞治疗肿瘤项目中比较困难的一个点：生物样本的管理；希望对大家有用~

　　我所做的CAR-T项目生物样本检测种类很多，大致按样本类型归为骨髓活检样本、骨髓样、血样、尿样四类。

　　样本类型

　　骨髓液-MRD采样注意：

　　1.骨髓液24小时内需寄送至中心实验室。一般在比快递预约时间提前约一个小时准备开始采集，采集完成后立刻寄送，无需将样本静置、超低温保存等处理。

　　2.安排好各随访检测，PET-CT和骨髓穿刺同一天时，不可以先做PET-CT。其次，做完骨髓穿刺，受试者手术伤口疼，会影响日常活动，如果有需要到门诊去做的检查，可以提前或者延后预约，时间尽量错开半日以上。

　　3.各时期检查随着随访计划表是有不同安排的，一般MRD 项目要求单管采集4ml骨髓液，但在某些患者身上，骨髓液粘稠，可呈棉絮状，研究者通过注射器抽吸的方法，无法满足采集量。CRC应该协助研究者在生物样本记录表内明确登记采集样本量，同时沟通项目组以寻求指导。

　　结果一般3-4个工作日内通过中心实验室网站可查询。

　　骨髓液-FISH：一般在筛选制备前，会收集FISH的骨髓样本，作为一项重要的试验数据，一般是和MRD同批次寄送到指定外地中心实验室。

　　骨髓组织活检：受试者髂骨穿刺，取出活的组织。按照方案要求进行，通常患者做完骨髓穿刺需要避免伤口处的发炎和感染，不能沾水。有时骨髓活检是十分频繁的，当研究者认为疗效评估良好，受试者无异常主诉及症状，考虑到局部感染的风险，以及手术带给受试者的痛苦，会考虑跳过某次随访的骨髓活检。前提是我们协助和项目组/申办方沟通明确这样是否可行，保留沟通邮件，将讨论的结果整理交给研究者做保存记录。

　　活检样本一般送至本地中心实验室。纸质报告在5个工作日左右可去病理科取得。

　　骨髓组织-免疫组化：通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及相对定量的一种方法，送检至本中心实验室，一般只需要前期提供的骨髓样本即可。

　　免疫组化结果会在骨髓活检完成后申请免疫组化的7个工作日之内在LIS系统查到或去病理科取得，其报告和骨髓活检出在一张检查单上，结果分为：

　　-（阴性）、个别+（个别阳性）、+（阳性），提示检测分子是否存在于受试者骨髓组织的细胞内。

　　血样：在以中心实验室手册要求为准的原则下，我分享一些个人经验

　　全血/血浆：随访血样应在同一天同一时段采集完成，采样管和分装管主管同时在24小时内寄走。

　　血样-RCL/VCN/NGS：评估CAR-T安全性指标。一般要求超低温（负60度甚至负80度）保存，寄送外地中心实验室。

　　需要注意的是：一定仔细阅读随访计划表的备注对于RCL/VCN/NGS的要求，依照方案备注要求，主要随访期每次必测RCL与NGS，VCN按照方案备注内容无需每次都测。

　　RCL原理：CAR-T的生产中常用慢病毒载体将CAR基因导入T细胞中。尽管慢病毒载体具有复制缺陷，但如果在慢病毒生产过程中发生穿梭质粒、包装质粒和T细胞之间或慢病毒载体与T细胞的内源性逆转录元件之间重组，则可能导致复制型慢病毒（RCL）的潜在风险。

　　外周血CAR-T细胞数量：了解CAR-T在体内复制数量的情况。样本要求低温（2-8度）保存。24小时内寄送。

　　IL-6(白介素6)：监测体内炎症的一项指标，代表CarT细胞和肿瘤细胞的斗争强弱，该值升高需警惕CRS反应，通常在回输开始前后测定，发热受试者通常伴随IL-6指标升高，IL-6恢复正常则发热停止，强烈的炎症反应可能会造成机体负担过重从而导致受试者出现SAE，这也意味着回输回输期间需要密切观察受试者的情况。样本要求低温（2-8度）保存。

　　当受试者开始回输，就一定要备份充足IL-6的试剂盒。结果需要3日，出具后第一时间发给研究者。我的项目是受试者渡过回输期后，主要随访期就不会再测IL-6水平。

　　了解“CRS反应”，这有一个传送门：
　　http://app.house086.com/mag/circle/v1/forum/threadWapPage?tid=136969&fid=37

　　免疫球蛋白：carT攻击恶性克隆性细胞通常会影响（抑制）自身免疫功能，尤其是骨髓瘤受试者，恶性肿瘤组织学来源是B细胞，抑制B细胞则，受试者正常的免疫球蛋白分泌减少，表现在受试者血液免疫球蛋白水平均在20g/L水平线上下（参考值：20-40），对于发生低免疫球蛋白血症的AE，研究者将会考虑使用球蛋白类药物。（样本要求2-8度保存）

　　肿瘤指标：疗效评估的指标。对于多发性骨髓瘤（MM）就是指血M蛋白定性，定量测定。

　　随访开始提前确认流程，准备包括（不限于以下物品）：
　　1、生物样本申请单
　　2、生物样本运输单
　　3、生物样本采集记录表
　　4、生物样本试剂盒及分装管
　　5、冰箱门钥匙及冰箱钥匙
　　6、防湿袋及绒布

　　随访尿样：用于疗效评估。

　　骨髓瘤受试者采集尿样比较特殊，需要采集24h尿样。计量并分装尿样，一般取33ml，（3-4管），寄送。

　　寄送的血样一般采集30ml（7-9管）,骨髓液（1-2管）一般寄送至外地指定实验室，报告可通过实验室网站查询，以明确本次疗效评估的结果和安全性的评估结果。

　　以上内容是CART治疗多发性骨髓瘤项目生物样本的相关经验，有错误之处欢迎大家指出，且不同的CART项目肯定也有区别，仅以此文跟大家共同学习~